为了防止组织样本因离体时间太久细胞发生变化，样本离体后最好在20min以内固定，以方便后续检测。注意送检的样本必须是固定好、且固定时间超过2天。不同的组织样本、不同的检测目的，其固定方法也不相同，详细解说如下：

病理检测样本

1、组织样本

a、组织离体清洗后应立即固定，固定液一般10%中性福尔马林或4%多聚甲醛(尽量不要用酒精固定)，室温保存。

b、固定用的器皿必须根据样本体积而定，组织固定液的体积应是样本体积的10-15倍，且不宜用V型底，细长或小管固定。大组织标本应切开固定，以免中间部分自容腐败，如有特殊要求，请自行根据实验要求选择其他处理方式。

c、如果是冰冻切片标本，必须新鲜(处理步骤：组织离体后用OCT包埋，-80℃保存。送检过程中必须有足够多干冰或冰袋)。

d、特殊的组织需要用特定的固定液，避免样本发生变化，影响后续检测。（参考下图）

e、胃、肠道的内容物处理需特别注意：切忌不能用挤的方式，会破坏黏膜，可以用针打10%中性福尔马林或者4%多聚甲醛到胃和盲肠里面去固定一会，半个小时切开用10%氯化钠溶液清洗，然后再固定。

f、对于皮肤、肺等比较轻，容易漂浮在固定液上面的组织：可以选择在固定液上面放沾湿的棉花团压住，避免组织漂浮在固定液上导致固定不充分。或者再完整的肺组织离体后，往主支气管中灌固定液冲洗整个肺部，并使肺部充盈，然后把充盈后的整肺放入固定液中送检。

2、细胞样本

a、贴壁细胞：细胞消化后，离心，倒掉培养液保留细胞沉淀，用PBS洗一遍，离心倒掉液体保留细胞沉淀后，加固定液(10%中性福尔马林或4%多聚甲醛)重悬，常温送检。

b、悬浮细胞：离心，倒掉培养液保留细胞沉淀，用PBS洗一遍，离心倒掉液体保留细胞沉淀后，加固定液(10%中性福尔马林或4%多聚甲醛)重悬，常温送检。

3、电镜样本

a、取样组织2mmX2mm大小，尽量薄。如来不及修整组织大小可先于电镜固定液内固定半小时左右待组织变硬以后再修整组织进行后固定。超出此范围后组织会无法完全固定，后续实验无法完成，务必请重视此过程。

b、取材时尽量精确到需要观察的目的部位（如观察肾小球取肾皮质；观察胰岛取胰岛丰富的胰尾；皮肤，肠胃等在固定液中易打卷的组织可将组织粘在滤纸上进行固定）。

c、注意避免镊子挤压等机械损伤，刀片要锋利避免挫伤组织。

d、织取下后立即投入电镜固定液内室温固定2h，再转移至4℃保存，4℃冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。4℃时样本可保存1个月左右。

生化检测样本

1、血液样本

根据不同的检测指标，选择不同的血液抗凝剂。都为-80℃保存。，以下样本尽量新鲜！

血清样本收集：无抗凝剂的红头管/普通EP管采集全血标本，需要预留一定空间便于血清分离，采集后4℃静置10-20分钟，-prm，离心10-15分钟，取上清于EP管中，于-20℃或-80℃保存运输，中途应避免反复冻融。请勿晃动采血管，红细胞易破碎，出现溶血，从而影响实验结果。

血浆样本收集：可用肝素钠（绿头管）或EDTA（紫头管）做抗凝剂，缓慢颠倒十次使血浆与抗凝剂充分混合，4℃静置10-20分钟，-prm，离心10-15分钟，取上清于EP管中，于-20℃或-80℃保存运输，中途应避免反复冻融。请勿激烈晃动采血管，红细胞易破碎，出现溶血，从而影响实验结果。

组织匀浆样本收集：用预冷的生理盐水冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果）与其他物质，称重。匀浆介质的体积总量(ul)是组织块总量(mg)的9倍，制备成10%的匀浆液。加入玻璃匀浆器中，于冰水浴条件下充分研磨。为了进一步裂解组织细以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于-prm，离心5~10分钟，取上清检测。如匀浆制备有困难，可联系公司相关技术支持咨询。

总结：

生化：建议优先选择血清，其次选择肝素抗凝血浆；

ELISA：建议优先选择血清，其次选择肝素或EDTA抗凝血浆；

凝血实验：只能选择枸橼酸钠抗凝血浆；

血常规：只能选择EDTA抗凝全血；

几种检测常用的真空采血管介绍(参考下图）

2、组织、细胞样本

动物组织样本取材

a)取材应在冰上进行，取材后组织用生理盐水冲洗干净，去除血渍和污物，并剔除非研究所需的组织

b)吸干水渍并切小块，放入已标记的冻存管中，液氮速冻后，转运至-80℃冰箱保存

动物组织样本如何寄送？

首先注意寄送过来的样本为固定好、且按照样本保存要求执行的。

a、固定液固定的组织样本、组织蜡块、白片及其他非荧光染色玻片为常温寄送。玻片在包装时注意放入纸巾或气泡膜防震。

b、4℃保存的样本在寄送时选择冰袋运输，在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。

c、荧光染色玻片送检：置于载玻片盒中低温避光送检，可在里面放入纸巾或气泡膜防震，外面包一层锡纸避光，放足够冰块或干冰低温送检。

d、冰冻切片样本送检过程中必须有足够多干冰，选用保温泡沫箱进行包装。

e、送检的标本应具有物种、标本类型、标本离体时间、固定时间、固定类型、组织部位等信息，信息必须与送检纸质信息一致并清晰，并确定组织是否固定完全，如果难以判断，请与病理实验室工作人员联系咨询。

f、体积过小过薄的组织样本易丢失，不建议送检(如厚度＜1mm的样本)。

取材中各器脏常规采集要求：

1、取材前需进行动物麻醉、放血，避免组织内部血液太多，固定不充分;

2、动物死亡、组织离体后尽快(不可超过10分钟)固定或冻存，避免组织出现自溶;

3、取材需取同一脏器同一部位，后期实验结果才具有可比性;

4、取材时器械要锐利，避免出现挤压、刮抹而造成的组织变形、缺损;

5、组织浸入固定液前需生理盐水冲洗，避免组织固定不充分而影响组织基本形态;

6、取材后的组织块不宜过大，一般不超过长X宽X高:2.0cmX2.0cmX0.5cm。

细胞样本如何寄送？

充液法常温运输（T25瓶）

一般选择生长良好的细胞，以生长60%~70%为宜，去掉旧培养液，补充新的培养液至瓶颈部，保留微量空气，拧紧瓶盖，并用封口膜密封，放在运送盒内，用棉花等做防震防压处理。常温，到达目的地后倒出多余的培养液，只需保留维持生长所需的培养液置37℃培养，次日传代。提示：细胞寄送时，需告知细胞名称、培养条件及冻存条件。

冷冻储存运输（冻存株）

干冰运输冻存细胞，外地寄送根据温度和寄送时间，一般约需要5-10kg干冰。

总结：

组织样本离体清洗后液氮速冻5min，-80℃保存。

细胞沉淀后-80℃保存。

病理样本如何保存寄送？

1.病理样本保存方法

固定法:适用于标本的长期保存，且组织细胞形态结构保持较好，能准确定位组织细胞。

a、浸入法从人体或动物取下的小块组织，立即置入液态固定剂中进行固定，这是最常用的方法。通常标本与固定液的比例为1:10~1:20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透，2h以内需更换一次固定液。

b、灌注法组织块体积大或固定液极难渗入内部，可将固定液注入血管，经血管分支到达整个组织和全身，从而充分固定。该法普遍应用于脑部疾病的科学研究。利用天然血管网，快速、均匀地保存标本，以保持标本类似活体状态、尽量保持抗原性。

2.冻存法

冰冻样本能够较好的保存组织的抗原免疫活性，其制作过程较石蜡切片快捷、简便，缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散。多应用于手术中的快速病理诊断.

a、动物组织需尽快取材保存，取材应在冰上进行，取材后组织用生理盐水冲洗干净，去除血渍和污物，并剔除非研究所需的组织;

b、吸干水渍并切小块，放入已标记的保存容器中，液氮速冻后，转运至-80°C冰箱保存，运输时请使用大体积干冰运输

特殊组织取材/固定注意事项

部分组织离体后极易自溶，在常规固定液中无法快速固定，需采用特殊方法采集与固定，方可保证后期病理制片及诊断质量。

a、肠道:需用生理盐水轻轻冲洗，再向肠道内注入固定液，慢慢推出内容物，肠道慢慢恢复至充盈状态时再浸入固定液。

b、睾丸、眼球、脊髓、肌肉等组织:推荐使用对应的特殊固定液进行固定，以保证固定效果。

c、骨组织或钙化组织:需进行充分脱钙，只有组织变软后才可取材。

一般方法为ETDA恒温慢脱，持续2--3个月左右，期间需定期修剪组织和换液，组织形态完好;

也可加酸急脱，持续1周左右，组织形态不完整及抗原丢失。

脱钙完成后可进行取材，或置入75%酒精中保存寄送。

d、脑组织:脑组织耐氧能力差，抗原易发生变性，尤其对于大动物,需进行灌注取材来实现对脑组织的快速固定；

e、细胞爬片:爬片后4%多聚甲醛固定0.5h,吸去固定液，如需寄送，4℃保存并于2h内及时送样处理，否则将影响后期染色效果。