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细胞培养对无菌环境的要求较为严格，稍有不慎细胞全军覆没，损失惨重。为此保持细胞室的无菌环境尤为重要。细胞培养间的杀菌主要涉及空气的杀菌和操作台，培养箱的灭菌，其常见的方法如下。

一、细胞房常规操作规范

1、每天使用细胞房前需提前将层流室及缓冲间紫外灯打开照射30min。2、紫外灭菌消毒结束后通风15min，实验人员方可进入细胞房工作。3、进入细胞房前先换专用鞋。4、进入缓冲间穿换上专用实验服。5、进入层流室须戴上手套、口罩，消毒后才可以进行实验。6、每间层流室内最多可4个人使用，除实验外，避免长时间逗留。7、实验操作时尽量避免交谈，走动。8、始终保持细胞房内外地面、桌面的清洁，物品摆放整齐。9、每天工作结束后，需关掉细胞房内不用的仪器、细胞房的灯、空调，离开时锁好细胞房的门。10、细胞房内的实验服、鞋帽禁止穿出实验室。11、细胞房内垃圾及时清理，每周对细胞房进行消毒清洁。

二、培养箱使用

1、从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。2、培养瓶皿放入培养箱前，可以用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。3、按预定位置摆放培养器皿，方便查找，以免长时间敞开培养箱。4、普通培养中的细胞，若非实验需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次。5、每次从培养箱拿取物品时，注意培养箱的CO2补给情况，及CO2钢瓶中气体使用情况。

培养箱消毒

三、超净台使用

1、超净台使用前用紫外灯照射15分钟灭菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，所有物品放入超净台内使用前均应消毒。2、如需点燃酒精灯，需检查瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高1/3-2/3。3、超净台中应摆放废液杯和废品杯各一只，用于暂时存放废弃物，实验结束后将杯内垃圾倒入水池或垃圾桶中，并冲洗晾干备用。

四、显微镜使用

1、显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。2、离开细胞房时或较长时间不需使用时，及时关上电源，延长灯泡寿命。尽量避免频繁开关显微镜电源。

五、如有污染细胞间灭菌方法

在日常细胞培养工作中可采用以下几点来控制支原体的污染问题:

1、从可靠来源引进、使用细胞,特别是知名的信誉良好的专门机构,如ATCC、基础医学细胞中心等,这些机构对细胞质量进行一系列检测。

2、预防为主:细胞培养实验室应制定严格的管理制度,按照规范的实验程序操作。特别提醒一般实验室可从戴口罩、帽子做起。

3、定期对实验室中的培养物进行支原体检测。这也是国外一些重要实验室的经验。一旦发现已经污染支原体的培养物,灭活后弃之。更换新的培养物。避免支原体的进一步播散。

细胞培养基消毒灭菌

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